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金冠游戏注册:新冠疫情下的分子生物学实验室建设与管理

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日期:2020-11-30 20:32:02 来源: 检验医学微信公众号 作者:张治旺 点击:


作者 | 张治旺

单位 | 德州市陵城区疾病预防控制中心




为了有效防控新型冠肺炎疫情,全国各地快速建设了一批符合二级生物安全的分子生物学实验室,新实验室的投入使用为各地最终战胜新冠疫情提供了强有力实验室技术保障。


怎样才能又快有好的把实验室建设好,管理好呢?我从以下几个方面介绍一下实验室建设中应注意的问题。


1

找一家靠谱的分子生物学实验室设计、施工单位


现在市场上分子生物学实验室设计、施工单位良莠不齐,很多设计施工单位并不专业,存在这样那样的问题。


为了在实验室建设中少走弯路,我们作为实验室的使用方,应该了解一下分子生物学实验室建设标准:


GB50346-2011《生物安全实验室建筑技术规范》、WS233-2017《病原微生物实验室生物安全通用准则》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》、GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》、《临床基因扩增实验室管理暂行办法》、卫生部《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发【2010】194号、新型冠状病毒实验室生物安全指南(第二版)等实验室建设方面的技术资料。 


2

分子生物学实验室设计理念、装修要求、净化空调系统、通风、自控、工艺设备等几个关键点


01

分子生物学实验室实验室为二级生物安全实验室至少应分为:试剂准备区、标本制备区、标本扩增分析区。每个独立的实验区都有一个缓冲区。


同时,每个区域均采用气压调节(最好选择自动调压装置),使试剂和标本在整个新冠核酸检测过程中免受气溶胶污染,同时保护操作人员和环境安全。


增加机械连锁门(连锁门旁边应设置一键解除按键)、传递窗确保试剂和标本在转移过程中不受污染。


为避免交叉污染,PCR实验室空气流向必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂储存和准备区:房间压力(Pa)+5→标本制备区:房间压力(Pa)-20(标本制备区潜在生物危害最高)←扩增分析区:房间压力(Pa)-10。


对于新冠核酸检测实验室,当PCR实验标本需要保护时建议设置净化,各功能用房内空气不能掺混。PCR实验室应采用新风直流空调系统,当采用新风系统有困难时,各区域的空气只能在自己的房间内循环。


按照新型冠状病毒实验室生物安全指南(第二版)的规定,2019-nCoV病原体暂按照第二类病原微生物进行管理,标本制备区宜为负压或加强型P2实验室,加样、核酸模板加入操作应在生物安全柜内进行。


02

气流组织宜采用上送下排,送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到最小程度。


03

在生物安全柜操作面或其他有气溶胶操作地点的上方附件不得设送风口,标本制备区生物安全柜:BSC-Ⅱ-B2型。


04

高效过滤器排风口应设在室内被污染风险最高的区域,单向布置,不得有障碍。


05

不能以回(排)风夹墙代替排风直管,排风高效过滤装置与排风总管的连接必须全部是实体风管。


06

标本制备区设置洗眼装置,应急喷淋装置;非接触式(感应式水龙头、感应式自动门、互锁传递窗等);一个完善的实验室在分析检测中起着重要的作用,对保证实验室工作人员的健康也起着重要的作用。


07

考虑到次氯酸钠对金属的腐蚀性,装修材料尽量不选裸面不锈钢材质,以免造成金属材料锈蚀。


08

塑料排水管接口应考虑到热涨冷缩因素,以免因为温差导致接口脱胶污水外漏。


09

各室内门应有开关指示,有应急逃生指示箭头,有足够的灭火器材(宜放置二氧化碳气体灭火器)及应急破拆工具等急救器材。


3

为了保障实验室正常运行应做到以下几点


01
专业并且经过培训的实验人员


人员应经过专业的生物安全培训、应有分子生物学相关培训持证上岗。


进入PCR实验室,实验人员应接受基础理论、实验原理、标准操作、质量保证、注意事项等方面的标准培训,并接受市级以上卫生部门技术培训方可上岗。


标本操作过程中由于标本盖的打开、核酸提取的振动和离心作用,可能产生气溶胶,存在感染的风险。


标本制备室工作人员个人防护必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进行标本制备。


成立生物安全委员会,制定实验室生物危害评估方案,制定切实可行的生物标本泄露处置应急预案,定期开展实验室生物危害评估,将潜在的生物安全危害因素上报生物安全委员会并及时改进。


02
合理的实验室检测流程


01
标本签收

采样人员将标本采集信息编辑成电子表格发送至实验室专用邮箱,标本运送人员和实验室标本接收人员(一级防护)应当对标本进行双签收。


标本管理员接收检查混采登记表是否填写完整,被检者信息是否可追溯,转运箱、二层容器有无破损。


标本管理员根据实验室标本编号程序,将标本根据类型编号登记,并及时打印标本检验结果报告单由实验人员带入实验室。


02
实验室检测

?穿防护服


按顺序穿三级防护服:帽子,N95口罩,防护服,内层手套,内层鞋套,外层一次性隔离衣,外层手套,外层鞋套,面屏。


?准备


两名实验人员将标本转运箱带入二区,进入缓冲间,套垃圾袋。


进入核心区,箱体喷75%酒精,打开水浴箱56℃,打开生物安全柜灯光和风机,在安全柜台面铺一层吸水衬垫或食品袋,将废液缸套入食品袋,向食品袋倒入75%酒精,打开标本转运桶喷75%酒精(注意标本标记号为油性笔书写,禁用75%乙醇),取出标本管,用酒精喷标本管和桶。


?标本信息核对


在生物安全柜内打开转运桶,根据标本随样清单逐一核对标本信息。


取出采样管,检查管壁是否有破损、管口渗漏等,确认无破损、渗漏后用75%乙醇喷洒或擦拭消毒(注意标本标记号为油性笔书写禁用75%乙醇)。


如有破损、渗漏,应当立即停止操作,用吸水纸覆盖后使用0.55%含氯消毒剂进行消毒处理,做好不合格登记后销毁(慎重)。


?实验过程


标本核对无误将标本管放入架子,用酒精喷洒,标本管从生物安全柜取出放入水浴箱,56℃30min灭活。


灭活期间每隔10min震荡混匀一次以保障灭活彻底,每份标本准备EP管各1个,标注标本编号,如不需要长期保存标本此步骤可忽略。


标本灭活完毕,从水浴锅取出,用酒精喷洒后放入安全柜。


打开标本管,用移液器抽吸后吸取适当量加入标本槽。如需长期留样,可吸取1.5mL加入冻存管保存。标本管用酒精喷洒后放入塑料袋。


用核酸提取仪对标本进行核酸提取纯化,工作完成后做好实验室消杀工作,并填写《基因扩增荧光定量检测记录》。


另一名实验人员在一区配置体系,根据试剂盒要求精准配置核酸反应体系,实验完成后做好室内消杀工作,并填写《基因扩增荧光定量检测记录》。


?工作完毕污物及实验操作台面处理


将所有废物放入废液缸中食品袋,扎紧,用酒精喷洒后取出放入垃圾袋。用酒精喷洒安全柜台面,用纸巾擦拭,更换手套,喷洒双手,手臂及身体,关闭安全柜,开紫外线。


?脱防护服及污物处理


在门口脱下面屏,外层鞋套,连同外层手套一起脱下外层一次性隔离衣,放入垃圾袋,戴外层手套,扎紧垃圾袋,出核心区。


在缓冲间脱去外层手套,按照以下顺序脱防护服:


解开内层鞋套系带,将防护服拉链打开,抓住领口外侧向下拉扯脱去袖子,此时不要摘手套,将防护服向下逐渐卷入,直到连同鞋套一起脱去。


摘掉一只手套并摘下眼镜,用戴手套的手摘掉口罩,戴上眼镜,脱去手套,手消后及时佩戴外科口罩,用手插入帽子内侧并摘下帽子。


所有废物放入垃圾袋,系紧垃圾袋,放入高压锅高压。将转运箱带出实验室,在转运箱存放室打开紫外灯进行紫外外照射30分钟。


03
检测结果判读及传输

核酸在三区扩增后实验人员根据标本扩增情况进行初步分析,同时实验人员应将检测数据及时上报室主任对检测结果进行复核,复核无误后方可将实验数据外传至标本接收室。


标本管理员应及时将标本结果报告单上报分管领导。室主任对混采检测结果为阳性、灰区或单个靶标阳性,通知分管领导,分管领导上报相关部门对该混采管的10个受试者暂时单独隔离,并重新采集单管拭子进行复核。


复核单管核酸检测如均为阴性,则按照阴性结果汇报。暂时隔离人员即解除隔离;如检测结果阳性,实验人员应按程序上报分管领导。


实验人员严禁将原始数据未经室主任同意擅自外传,标本管理员要做好信息保密工作。


04
检测质控

每批检测至少有1份弱阳性质控品(第三方质控品或自配,通常为检出限的3倍左右或接近阳性判定值)、2份阴性质控品(试剂盒自带阴性质控品)和1份空白对照品(生理盐水或焦碳酸二乙酯处理水)。


空白对照品应当开盖放置在提取仪或操作台面上过夜,用于环境污染评估。质控品随机放在临床标本中,参与从提取到扩增的全过程。


注:设置标本提取空白、人源内标参与标本核酸提取纯化。


05
标本保存

不能及时检测的标本放入专用冰箱保存。24小时内检测的标本可置于4℃保存。24小时内无法检测的标本应当置于-70℃或以下温度保存。


如无-70℃保存条件,则于-20℃暂存。避免标本反复冻融。设立专库或专柜保存标本,双人双锁管理。


06
废弃物处理

阳性标本,核酸扩增产物需要用1mol/L盐酸浸泡30min后处理;一区、三区产生医疗垃圾需要一次高压灭菌,二区产生的医疗垃圾需要二次高压灭菌。


高压消毒时要放置化学指示卡验证消毒效果,医疗垃圾高压消毒后进行称重,粘贴医疗垃圾类型专用贴纸后放置医疗垃圾暂存处移交第三方公司处理。


医疗污水每周投放含氯消毒剂,检测达标后排放并做好记录。


07
记录登记及结果保存

实验人员及时将各种仪器使用记录,实验室紫外灯记录,污水消毒登记记录等记录及时登记并存档;管理员将标本结果根据标本类型进行分类汇总并及时将相关数据汇报给分管领导,将所有纸质资料及时归档保存。


符合标准的的二级实验室、专业的人才队伍、合理的标本检测流程必将为我们最终战胜新冠疫情提供强有力的技术保障。



END





(责任编辑:xsq)

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